RealECL發光液 Ver.740574
● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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保存條件
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EC2520-01
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RealECL發光液
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25 ml
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2-8℃
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EC2520-02
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RealECL發光液
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100 ml
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2-8℃
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EC2520-03
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RealECL發光液
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500 ml
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2-8℃
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說明書
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一份
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● 產品簡介：
RealECL 是一種超敏ECL化學發光試劑盒，可與二抗上耦連的辣根過氧化物酶（HRP）發生化學反應，發出熒光，從而可以通過用X光片壓片或其它適當熒光成像設備檢測樣品。RealECL具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測出10-100 fg的微量抗原；發光迅速，熒光可使X感光膠片感光達1小時以上，特別適用于痕量蛋白檢測；另外高靈敏度可以大大節省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量，降低實驗成本。
● 貯存、運輸及效期：
2-8℃貯存；有效期一年；濕冰運輸。
● 注意事項：
1. RealECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效，影響后續的使用效果。
2. 各溶液使用后，請蓋緊瓶蓋，以防失效。
3. 為獲得最佳實驗結果，請務必優化實驗條件，包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇。
4. 由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作為防腐劑；如果二抗中含有疊氮鈉，發光實驗前要進行5次TBST或PBST漂洗，每次10分鐘。
5. 在與膜發生接觸過程中，請佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材，避免蛋白污染產生高背景。
● 使用說明：
1. RealECL工作液的配制：等體積混合適量RealECL A液和B液，常溫放置備用。工作液宜在臨檢測前配制。
2. Western二抗孵育后，進行數次洗滌，用平頭塑料鑷子將膜取出，用濾紙略吸去過多的液體(切勿接觸膜的蛋白面)，但不要使膜過度干燥，然后將膜平鋪于一潔凈保鮮膜上，避免產生氣泡。
注：某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光，請選擇ECL專用保鮮膜獲得更好的實驗效果。
3. 根據膜的大小，按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工作液的比例，滴加RealECL工作液到膜上，確保使工作液均勻覆蓋在膜上，常溫放置1-2分鐘。
注：為達節約目的可將膜減小但勿降低發光液用量，確保發光液完全覆蓋于膜上。
4.將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。
5.可以使用ECL發光檢測儀器或暗室曝光。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內，在黑暗中放入X感光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘，顯影定影觀察沖洗結果。如掌握不好曝光時間，可以在膜上放置3-4張X感光膠片，統一曝光3-5分鐘，顯影后選擇一張曝光最好的膠片。
應用示例：
綠蘿總蛋白，RbcL一抗 1：2000，羊抗兔IgG-HRP 1：2000
a PVDF膜用抗體清除液處理后再用RealECL曝光。